Фaрмaкогноcтичеcкий анализ сырья травы горца птичьего фирмы «Иван чай» и травы хвоща полевого фирмы «ЗАО Фарм»
Мочегонные травы помогают вывести из организма лишнюю жидкость, предотвращают и снимают отёки. Многие из этих растений уничтожают патогенные бактерии, попавшие в мочевыделительную систему, купируя воспалительный процесс, очищая мочевыделительные путей от продуктов воспаления. Горец птичий применяют, для лечения мочевыводящих путей, при различных отёках и мочекаменной болезни. Трава хвоща полевого кроме мочегонного действия оказывает ещё и болеутоляющее действие; она также, используется при заболеваниях почек, мочевого пузыря, патологическом недержании мочи.
Цель. Проведение фармакогностического анализа лекарственного растительного сырья травы горца птичьего и хвоща полевого фирм «Иван чай» и «ЗАО Фарм».
Материал и методы. Материалом исследования послужили: трава горца птичьего фирмы «Иван чай» и трава хвоща полевого фирмы «ЗАО Фарм». Анализ сырья проводили в соответствии с ГФ Х1, (вып. 1).
Результаты. При макроскопическом анализе проводили визуальный осмотр сырья, определяли, запах и вкус водного извлечения. Анализ показал, что сырьё травы горца птичьего и хвоща полевого соответствует требованиям нормативной документации(ГФ-X1 (cт.56 и ст.50)).
Микроскопический анализ подтвердил наличие характерных диагностических признаков горца птичьего: наличие на поверхности эпидермиса клеток с прямыми утолщёнными стенками, устьичный аппарат анизоцитного типа, большое количество друз оксалата кальция. Фитохимический анализ подтвердил наличие флавоноидов, дубильных веществ и аскорбиновой кислоты в сырье.
При микроскопическом исследовании травы хвоща полевого обнаружены характерные диагностические признаки сырья: клетки эпидермиса сильновытянутые, устьица слегка погружённые, со складчатой кутикулой. Фитохимический анализ доказал, что в траве хвоща полевого содержатся флавоноиды, фенольные кислоты и дубильные вещества.
Ключевые слова: горец птичий, хвощ полевой
Источник
«ФС.2.5.0069.18. Фармакопейная статья. Горца птичьего (спорыша) трава» (утв. и введена в действие Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749) («Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том IV»)
Собранная в фазу цветения и высушенная трава дикорастущего однолетнего травянистого растения горца птичьего (спорыша) — Polygonum aviculare L., сем. гречишных — Polygonaceae.
Внешние признаки. Цельное сырье. Цельные или частично измельченные олиственные цветоносные побеги длиной до 40 см. Стебли тонкие, ветвистые, цилиндрические, коленчатые. Корни тонкие стержневые, ломкие, желтоватые. Листья простые, очередные, короткочерешковые, цельнокрайние, различные по форме, широколопатчатые или широкоэллиптические, обратнояйцевидные, реже узкопродолговатые или почти линейные, тупые или островатые, длиной до 3 см, шириной до 1 см. У основания листьев находятся два прилистника, сросшиеся в раструб. Раструбы серебристо-белые, пленчатые, рассеченные. Цветки расположены в пазухах листьев по 1 — 5. Цветки на коротких цветоножках; околоцветник простой, длиной 3 — 5 мм, глубоко надрезанный почти до 2/3, пятичленный. Тычинок 6 (8), пестик с верхней одногнездной завязью и 2 — 3 столбиками.
Цвет листьев и стеблей зеленый или серовато-зеленый, околоцветника в нижней части — бледно-зеленый, в верхней — белый или розовый. Запах слабый. Вкус водного извлечения слегка вяжущий.
Измельченное сырье. Кусочки стеблей, листьев и цветков, иногда корней, различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 7 мм. Цвет серовато-зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения слегка вяжущий.
Порошок. Кусочки стеблей, листьев, корней и цветков различной формы, проходящие серовато-зеленого цвета, проходящий через сито с отверстиями размером 2 мм. Цвет серовато-зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения слегка вяжущий.
Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении листа с поверхности должны быть видны клетки эпидермиса верхней и нижней сторон с прямыми утолщенными стенками и нередко с бурым содержимым, стенки клеток верхнего эпидермиса часто четковидно утолщенные. Кутикула по краю листа и над крупными жилками продольно складчатая. Устьица окружены чаще 3 клетками эпидермиса, из которых одна значительно меньше других (анизоцитный тип). По краю пластинки 1 — 3 ряда клеток эпидермиса имеют толстые оболочки и слегка вытянуты в сосочки. В мезофилле листа много друз оксалата кальция. Характерно наличие механических волокон, расположенных чаще над жилками с верхней и с нижней стороны, а также вдоль края пластинки листа. Волокна имеют извилистый контур и толстые оболочки.
При рассмотрении раструба с поверхности должны быть видны прямостенные клетки эпидермиса без устьиц, короткие в основании раструба и прозенхимные в остальной части по краю в несколько рядов расположены очень узкие клетки. Мезофилл выражен слабо, друзы отсутствуют.
При рассмотрении цветка с поверхности должны быть видны прозенхимные извилистостенные клетки эпидермиса.
При рассмотрении поперечного среза стебля должно быть видно пучковое строение с полостью в сердцевине, тонкие стебли без полости. В ребрах отчетлива выраженная уголковая колленхима. Первичная кора узкая, с отчетливыми, расположенными кольцом полостями. Пучки открытые коллатеральные, над флоэмой в 1 — 3 слоя расположены механические волокна. Эндодерма однослойная, в виде крахмалоносного влагалища.
Рисунок — Горца птичьего лист и стебель.
1 — фрагмент листа с устьицем анизоцитного типа и четковидно утолщенными стенками клеток (x200); 2 — фрагмент листа с друзами и механическим волокном (x200); 3 — фрагмент края листа с толстостенными, слегка вытянутыми в сосочек клетками эпидермиса с бурым содержимым (x200); 4 — фрагмент листа с толстостенными клетками эпидермиса (x200); 5 — фрагмент раструба с короткими и прозенхимными клетками эпидермиса и несколькими рядами очень узких клеток по краю (x200); 6 — фрагмент околоцветника с прозенхимными извилистостенными клетками эпидермиса (x200); 7 — поперечный срез стебля: пучковое строение с полостью в сердцевине (x90); 8 — фрагмент поперечного среза стебля: а — открытый коллатеральный пучок; б — склеренхима; в — эндодерма; г — уголковая коленхима; д — эпидерма; е — полость в первичной коре (x200).
Измельченное сырье. При рассмотрении препарата должны быть видны фрагменты листа с друзами и извилистыми механическими волокнами в мезофилле, с прямыми толстостенными клетками эпидермиса, нередко с бурым содержимым и слегка вытянутыми в сосочек, с устьицами анизоцитного типа; фрагменты раструба почти без мезофилла, с клетками от коротких до прозенхимных, по краю с несколькими рядами очень узких клеток; фрагменты околоцветника с прозенхимными извилистостенными клетками эпидермиса; фрагменты стебля пучкового строения с колленхимой в углах и полостями в первичной коре; фрагменты механических волокон листа.
Порошок. При рассмотрении порошка должны быть видны фрагменты мезофилла с друзами, клетки эпидермиса с прямыми четковидно утолщенными стенками с бурым содержимым, иногда слегка вытянутыми в сосочки, фрагменты механических волокон, раструбов с клетками от коротких до прозенхимных, по краю с несколькими рядами очень узких клеток; фрагменты околоцветника с прозенхимными извилистостенными клетками; фрагменты стеблей пучкового строения с колленхимой в углах и полостями в первичной коре.
Определение основных групп биологически активных веществ
Приготовление растворов.
Раствор стандартного образца (СО) кверцетина: около 0,005 г кверцетина растворяют в 10 мл спирта 95% и перемешивают. Срок годности раствора 1 мес при хранении в хорошо укупоренной упаковке, в прохладном, защищенном от света месте.
Тонкослойная хроматография
Около 1,0 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 30 мл спирта 70%. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 10 мкл испытуемого раствора; рядом наносят 10 мкл раствора СО кверцетина.
Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе в течение 2 — 3 мин, затем помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 60 мин смесью растворителей бутанол — кислота уксусная ледяная — вода (4:1:2), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 — 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей и просматривают в УФ-свете при длине волны 254 нм.
На хроматограмме раствора СО кверцетина должна наблюдаться зона адсорбции сине-фиолетового цвета.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться 3 зоны адсорбции сине-фиолетового цвета, верхняя из которых находится на уровне зоны адсорбции СО кверцетина.
Затем пластинку обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 2%, выдерживают в сушильном шкафу при температуре 100 °C в течение 2 — 3 мин и просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.
На хроматограмме раствора СО кверцетина должна наблюдаться зона адсорбции с желто-зеленой флюоресценцией.
На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться 3 зоны адсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета, верхняя из которых находится на уровне зоны адсорбции СО кверцетина.
Качественная реакция
К 5 мл фильтрата (см. «Количественное определение») прибавляют 4 — 5 капель железа(III) аммония сульфата раствора 1%; должно наблюдаться черно-зеленое окрашивание (дубильные вещества).
Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 13%.
Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 13%.
Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 4%.
Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, — не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, — не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, — не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, не более 5%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм, — не более 5%.
Корни. Цельное сырье — не более 2%.
Потемневшие и почерневшие части травы. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 3%.
Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье — не более 2%;
Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок — не более 2%.
Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок: суммы флавоноидов в пересчете на авикулярин — не менее 0,5%.
Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм. Около 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 150 мл, прибавляют 30 мл спирта 70%, колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры под струей холодной воды и фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют еще 2 раза указанным выше способом. Извлечения фильтруют через тот же фильтр в ту же мерную колбу, фильтр промывают спиртом 70%, доводят объем фильтрата тем же растворителем до метки и перемешивают (раствор А).
4,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30%, прибавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 2% в спирте 96% и доводят объем раствора спиртом 96% до метки и перемешивают (раствор Б).
Через 20 мин измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 410 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор состоящий из 4,0 мл раствора А, 0,5 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доведенный спиртом 96% до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.
Содержание суммы флавоноидов в пересчете на авикулярин в абсолютно сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
;
где A — оптическая плотность раствора Б;
— удельный показатель поглощения комплекса авикулярина с алюминия хлоридом при длине волны 410 нм, равный 330;
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Источник