Приложение. Ветеринарные правила лабораторной диагностики гриппа А птиц
1.1. Настоящие Правила устанавливают обязательные требования к организации лабораторной диагностики гриппа А птиц (далее — грипп птиц).
1.2. Положения настоящих правил обязательны для выполнения на территории Российской Федерации органами государственной власти, предприятиями или иными хозяйствующими субъектами, учреждениями, организациями, общественными объединениями, независимо от их подчинения и форм собственности, должностными лицами и гражданами.
2.1. Диагностические лабораторные исследования и серологические тесты по определению напряженности поствакцинального иммунитета (далее — лабораторные тесты) проводят в специализированных ветеринарных учреждениях.
2.2. Лабораторная диагностика гриппа птиц направлена на выявление в исследуемых объектах ветеринарного надзора:
антигенов вируса гриппа птиц;
антител к вирусу гриппа птиц.
2.3. При проведении лабораторных тестов могут быть использованы методы лабораторных исследований, применяющие:
тесты, утвержденные в установленном порядке;
тесты, которые реализуются с использованием тест-систем, зарегистрированных в установленном порядке в Российской Федерации.
3. Обязательные требования по отбору проб для проведения диагностики гриппа птиц
3.1. Отбор проб крови и патологического материала проводит ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку.
3.2. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора проб, юридическом или физическом лице — владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.
3.3. Для проведения исследований осуществляют отбор проб патологического материала (органы, ткани головного мозга, легких, трахеи, селезенки, участков кишечника, почек, сердца) от павшей или убитой с диагностической целью птицы.
3.4. От каждого стада птицы отбирают для исследовании 5-10 трупов или патологический материал от 5-10 трупов, клоакальные и/или трахеальные смывы от 10-15 голов, 1-10 сборных проб помета от стада.
У мелких видов птиц для отбора проб используют свежий помет.
Пробу помета рекомендуется отбирать из расчета 1 грамм помета на 60 точек птичника (выгула или вольеры), выбранных по диагонали крест-накрест.
3.5. Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц рекомендуется отбирать у 25-30 птиц из стада (партии), из одного птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).
Пробы крови отбирают из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре, или в термостате при 37°С в течение 1-2 часов, затем обводят иглой или пастеровской пипеткой, отслаивая сгусток крови от стенок пробирки, и оставляют на 16-18 часов при температуре 2-4°С. Образовавшуюся прозрачную без признаков гемолиза сыворотку отбирают с помощью пипетки в отдельные, чистые пробирки.
Отбор крови допускается проводить с помощью иглы и шприца (или вакуумной пробирки).
Рекомендуется проводить центрифугирование проб крови для получения сыворотки в течение 10-15 минут при 1000 об/мин для осаждения свободных эритроцитов.
Для серодиагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных или инфицированных птиц, в начале заболевания и через 4-10 дней.
3.6. Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается однократное замораживание сывороток.
При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3 группы патогенности.
3.7. Если немедленное исследование проб невозможно, допускается сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4°С.
При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы и/или изолят помещают в морозильную камеру с температурой -80°С.
4. Методы и сроки проведения лабораторных исследований
4.1. Для установления диагноза на грипп птиц допускается применение следующих методов:
а) для выявления вируса гриппа птиц — биопроба на СПФ (свободных от патогенной микрофлоры) — цыплятах с обязательным последующим подтверждением специфичности биологической реакции;
б) для выделения вируса гриппа птиц — метод выделения вируса на СПФ — куриных эмбрионах или в культуре клеток;
в) для обнаружения антигенов вируса гриппа птиц;
иммуноферментный анализ (ИФА) для обнаружения одного или нескольких белков вируса;
иммунопреципитация (двойная иммунодиффузия по Оухтерлони (далее — РДП) или иммуноэлектроосмофорез (далее — ИЭОФ);
иммунохроматографические методы (далее — ИХА);
радиоиммунный анализ (далее — РИА);
непрямая гем- и латексагглютинация;
реакция связывания комплемента (далее — РСК);
г) для обнаружения гемагглютинина (гемагглютинирующей активности) вируса гриппа птиц:
реакция гемагглютинации (далее РГА) с подтверждением специфичности в реакции торможения гемагглютинации (РТГА);
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
д) для обнаружения РНК вируса:
полимеразная цепная реакция (далее — ПЦР);
ПЦР с последующим секвенированием ее продуктов;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
е) для обнаружения антител к вирусу гриппа птиц:
ж) для субтипирования вируса по гемагглютинину и нейраминидазе:
сиквенс к ДНК или ПЦР-продукта;
Дот-блот и блот гибридизация нуклеиновых кислот;
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину;
з) для субтипирования противовирусных антител по гемагглютинину:
ИФА на основе моноспецифических сывороток или моноклональных антител к вирусному гемагглютинину.
4.2. Применение иных тестов допускается для получения предварительных результатов.
4.3. Методы проведения лабораторных исследований реализуются на основе утверждаемых в установленном порядке методик проведения обязательных диагностических исследований.
4.4. Сроки проведения лабораторных исследований устанавливаются в зависимости от метода исследования и не могут превышать 1 месяца.
Источник
Памятка для охотников по отбору проб на грипп птиц
Трупы птиц, внутренние органы (легкие, трахею, участок толстого отдела кишечника, печень, почки, сердце, селезенку) или головы от убитой птицы отбирают с соблюдением мер безопасности в полиэтиленовый пакет.
Доставку трупов птиц осуществляют в кратчайшие сроки. При отсутствии возможности доставки, патологический материал необходимо заморозить. Пробы направлять в ближайший филиал бюджетного учреждения «Ветеринарный центр» или бюджетного учреждения «Ветеринарная лаборатория», Сургутский филиал БУ «Ветеринарная лаборатория»; г. Ханты-Мансийск, ул. Рознина 64, тел.: 8(3467) 32-41-99, 32-42-60, г. Сургут, поселок Снежный, ул. Геодезистов 17/1, тел.: 8(3462) 74-74-02.
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в городе Белоярском
г.Белоярский, мкр. Мирный 22
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в Березовском районе
гп.Березово, пер.Совхозный 10
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в Кондинском районе
п.Междуреченский, ул.Кедровая 14
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в городе Нефтеюганске
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в городе Нижневартовске
г.Нижневартовск, ул.Интернациональная 24
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в Нижневартовском районе
г.Нижневартовск, ул.Зырянова 34
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в городе Нягани и Октябрьском районе
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в городе Советском
г.Советский, ул.Молодежная 38
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в городе Сургуте
Филиал БУ ХМАО-Югры «Ветеринарный центр» в Сургутском районе
г.Сургут, ул.Сергея Безверхова 2
Филиал БУ «Ветеринарный центр» в Ханты-Мансийском районе
г.Ханты-Мансийск, ул.Рознина 64
Следует помнить! Выделения зараженных птиц, могут заразить человека через воду при питье и купании, а также воздушно-капельным, воздушно-пылевым путем, и через грязные руки. При минусовых температурах вирус птичьего гриппа сохраняется, но нагревание до температуры +70°С — убивает вирус за несколько минут.
Для дезинфекции рук, для предотвращения заноса вируса с контаминированных объектов, в том числе различными видами транспорта можно использовать дезинфицирующие препараты, которые обладают активностью против вирусов.
Источник
Памятка по отбору проб на грипп птиц
Для проведения лабораторных исследований на грипп птиц осуществляют отбор проб патологического материала (головной мозг, легкие, трахея, селезенка, участок кишечника, почки, сердце) от павшей или убитой с диагностической целью птицы. От каждого стада птицы отбирают для исследований 5 — 10 трупов или патологический материал от 5 — 10 трупов.
Пробы крови для определения антител к вирусу гриппа птиц рекомендуется отбирать у 25 — 30 птиц из стада (партии), из одного птичника (зала) или одного населенного пункта, местности (водоема).
Пробы транспортируются во влагонепроницаемой таре, в контейнере с хладоэлементами или в термосе со льдом. Допускается однократное замораживание сывороток.При транспортировке проб соблюдают установленные ветеринарно-санитарные правила и меры безопасности, предъявляемые к транспортировке биологических материалов, содержащих инфекционные агенты 3-й группы патогенности.Если немедленное исследование проб невозможно, допускается сохранять образцы на протяжении 4 дней при температуре 4 0C.При необходимости для увеличения срока хранения диагностические образцы помещают в морозильную камеру с температурой -80 0C.
Отбор проб крови и патологического материала проводит ветеринарный работник, имеющий специальную подготовку. Пробы маркируются и опечатываются. К пробам прилагается сопроводительный документ, содержащий сведения о дате и месте отбора проб, юридическом или физическом лице — владельце птицы и месте его нахождения, виде, возрасте птицы и ее состоянии на момент отбора проб.
Источник
Отбор проб при гриппе птиц
* На территории Российской Федерации действуют: ГОСТ 29169-91, ГОСТ 29227-91-ГОСТ 29229-91, ГОСТ 29251-91-ГОСТ 29253-91, здесь и далее по тексту. — Примечание «КОДЕКС».
Настоящий стандарт распространяется на сельскохозяйственную, синантропную, дикую и экзотическую птицу и устанавливает методы лабораторной диагностики гриппа.
1. ОТБОР ПРОБ
1.1. Для проведения исследований отбирают пробы патологического материала:
головной мозг и селезенку или гортанные и клоакальные смывы от больной птицы в первые два дня заболевания или от птицы в агональном состоянии. Патологический материал помещают в термос со льдом или раствор глицерина с массовой долей 50%, приготовленный на физиологическом растворе с рН 7,2-7,4;
сыворотку крови больной и переболевшей птицы в количестве 1-2 см (не менее 20 проб).
1.2. Пробы крови для определения антител в сыворотке берут стерильно из подкрыльцовой вены в пробирки, увлажненные физиологическим раствором. Кровь выдерживают до образования сгустка при комнатной температуре или термостате при 37 °С в течение 1-2 ч, затем осторожно обводят иглой или пастеровской пипеткой по стенке пробирки и оставляют на 16-18 ч при температуре 2-4 °С. Образовавшуюся прозрачную без гемолиза сыворотку отсасывают пипеткой в стерильные пробирки.
Для ретроспективной диагностики используют парные пробы сывороток крови, полученные от больных и подозреваемых в заболевании птиц в начале заболевания и через 4-10 сут.
1.3. Пробы патологического материала и сывороток крови доставляют в лабораторию в термосе со льдом. К пробам прилагают сопроводительный документ, содержащий сведения о клинике, эпизоотологии заболевания, а также данные о результатах вскрытия трупов.
1.4. До начала лабораторного исследования патологический материал хранят в рефрижераторе при температуре 2-4 °С не более 24 ч.
1.5. Сыворотку крови исследуют в течение 3 сут со дня взятия крови. В случае исследования сыворотки в более поздние сроки ее замораживают или консервируют путем добавления мертиолата натрия до концентрации 1:10000.
2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1. Метод выделения вируса
Сущность метода заключается в выделении вируса на эмбрионах кур и последующей его идентификации.
2.1.1. Аппаратура, материалы и реактивы
Термостат с температурой нагрева 37-38 °С.
Центрифуга с частотой вращения 3000.
Центрифужные стаканы вместимостью 50-100 см.
Источник